风暴魔域挂机刷魔石,快速培养幻兽升星教程 | 文獻求助論文范文 | 論文題目 | 參考文獻 | 開題報告 | 論文格式 | 摘要提綱 | 論文致謝 | 論文查重 | 論文答辯 | 論文發表 | 期刊雜志 | 論文寫作 | 論文PPT
风暴魔域挂机刷魔石,快速培养幻兽升星教程您當前的位置:风暴魔域挂机刷魔石,快速培养幻兽升星教程 > 醫學論文 > 基礎醫學論文 > 免疫學論文

风暴魔域幻兽进化怎样选择最划算:免疫抑制小鼠灌服蠐螬多肽的療效分析

時間:2019-05-24 來源:免疫學雜志 作者:李可,曹碩,焦思敏,沈 本文字數:9666字

风暴魔域挂机刷魔石,快速培养幻兽升星教程 www.awyiy.icu   摘    要: 目的 觀察蠐螬多肽提取物對免疫抑制小鼠的免疫功能的影響。方法 采取蛋白酶水解提取蠐螬多肽, 電泳確定相對分子質量大小, 然后每天給小鼠灌服不同劑量多肽連續20 d, 除對照組外其余小鼠在實驗結束前連續3 d腹腔注射環磷酰胺, 試驗結束小鼠稱體質量、采血、無菌操作制備脾臟細胞, 體外培養添加脂多糖和刀豆蛋白A誘導細胞分化, 采用MTT和Griess法檢測細胞增殖率和NO分泌量;分光光度法和流式技術檢測血清溶血素及巨噬細胞吞噬功能, 遲發型超敏反應分析免疫原性。結果 酶解提取蠐螬多肽質量濃度為37.01 mg/ml, 提取率為31.63%, Mr在8 000~9 000。模型組小鼠脾臟肝臟胸腺指數顯著低于對照組和蠐螬組, 小鼠脾臟和骨髓T、B淋巴細胞存活率及NO分泌量明顯低于對照組和蠐螬組, 其中骨髓B淋巴細胞存活率顯著高于T淋巴細胞, 但脾臟和骨髓T淋巴細胞NO分泌量高于B淋巴細胞;對照組和蠐螬多肽組小鼠溶血素吸光度值顯著高于模型組, 隨著蠐螬多肽劑量增加溶血素含量逐漸提高, 但不存在劑量效應關系;蠐螬組小鼠血液白細胞數均高于模型組, 隨著劑量增加白細胞數提高;中高劑量蠐螬多肽組小鼠耳腫脹度高于模型組, 隨著蠐螬劑量增加耳腫脹度顯著增加, 存在劑量效應關系;蠐螬組小鼠腹腔骨髓脾臟巨噬吸光度值高于模型組, 隨著蠐螬多肽劑量增加吸光度值提高, 存在劑量效應關系;流式細胞技術檢測結果蠐螬組巨噬細胞吞噬雞紅細胞熒光強度強于模型組, 巨噬細胞吞噬雞紅細胞陽性細胞數不明顯高于模型組, 結果提示巨噬細胞吞噬能力強。結論 蠐螬多肽具有明顯增強免疫抑制小鼠免疫功能的作用。

  關鍵詞: 蠐螬多肽; 小鼠; 免疫功能;

  Abstract: This study was performed to investigate the effects of polypeptide extracts from grub on immune function of immunosuppressive mice. The grub polypeptides (GP) were extracted by protease method, and the size of the molecule was determined by electrophoresis. Then the mice were given orally different doses of grub peptides for20 days. All mice except the mice in control group were intraperitoneally injected with cyclophosphamide (CTX) for 3 days before the end of the experiment. The mice were prepared by weighing, collecting blood and aseptic operation for spleen cells. The cell differentiation was induced by lipopolysaccharide (LPS) and concanavalin A (ConA) , and cell proliferation and NO level were detected by MTT and Griess method. The serum haemolysin and macrophage phagocytosis were evaluated by spectrophotometry and flow cytometry, while the immunogenicity was analyzed by delayed hypersensitivity. Data showed that the concentration of polypeptide extracted by enzymolysis was 31.63% and the extraction rate was 37.01 mg/ml, with molecular weight of8 to 9 KDa. The spleen and liver thymus indexes of mice in model group were significantly lower than those of the control and the grub groups. The survival rate of splenetic and myeloid T and B lymphocytes and the secretion of NO in model mice were significantly lower than those of the control and the grub groups. The survival rate of B lymphocyte from bone marrow was significantly higher than that of T lymphocyte, but the secretion of NO in the spleen and bone marrow T lymphocyte was higher than that of B lymphocyte. The absorbance of haemolysin in control group and grub polypeptide group were significantly higher than that in model group. With the increasing of grub polypeptide dose, the content of hemolysin increased gradually, but there was no dose effect relationship. The number of white blood cells in grub groups was higher than that in model group. The ear swelling of the mice in medium and high dose grub polypeptide groups were higher than that of model group. With the increasing of grub dose, the ear swelling thickness increased significantly, and there was a dose effect relationship. The absorbance values of the macrophages from abdominal cavity and bone marrow as well as spleen of grub group were higher than those of model group, and there was a dose effect relationship. The fluorescence intensity of macrophage phagocytosis in grub group was stronger than that of model group, and the number of positive cells of macrophages phagocyting red cell was not significantly higher than that of model group, which suggested that the macrophage phagocytosis was strong. Taken together, polypeptides from grub can significantly enhance immune function in immunosuppressed mice.

  Keyword: Grub polypeptide; Mice; Immune function;

  蠐螬為金龜子科昆蟲朝鮮黑金龜子及同屬近緣昆蟲的干燥幼蟲, 在江蘇、安徽、山東和東北等地均有分布[1], 神農本草經記載其具有破瘀、止痛和解毒的作用。文獻報道, 蠐螬主要含有脂肪酸類、蛋白質、糖類、生物堿和甾體化合物等[2,3]。金哲等[4]發現蠐螬聯用羥基喜樹堿對人MGC-803胃癌細胞株有顯著性抗增殖作用, 陳梅等[5]發現蠐螬提取物能抑制家兔脈絡膜新生血管中的血管內皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子表達, 抑制脈絡膜新生血管的形成。

免疫抑制小鼠灌服蠐螬多肽的療效分析

  多肽是20種氨基酸以不同的的組成和排列方式構成的從二肽到復雜的線性或環形結構的具有不同生物活性肽類的總稱[6], 由于多肽結構樣式繁多, 其在人體生理和代謝上表現出多種藥理活性, 主要有提高免疫力、降血糖和抗氧化等功能。嚴銘銘等[7]分離得到了單一鹿茸多肽CNT14, 其能夠明顯促進小鼠海馬HT22細胞增殖。

  本研究擬從蠐螬中提取蠐螬多肽, 通過體內試驗分析其免疫調節作用, 為蠐螬的開發應用提供試驗依據。

  1、 材料與方法

  1.1 、實驗材料

  環磷酰胺 (CTX) 購于江蘇恒瑞醫藥股份有限公司, DMEM高糖培養基和胎牛血清 (FBS) 均購自美國Gibco公司, RPMI1640培養基購自美國HyClone公司, 刀豆蛋白 (ConA) 和脂多糖 (LPS) 購自美國Sigma公司, 噻唑藍 (MTT) 購自美國AMRESCO公司, 羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂 (CFSE) 購自北京化工廠, 蠐螬多肽 (GP) 由本實驗室制備。細胞培養板和酶標板購自美國Corning公司, 二氧化碳培養箱為日本SANYO產品, XSZ-D2倒置生物顯微鏡為重慶光學儀器廠產品, 粉碎機 (小型) 購于日本日立公司。6~8周齡健康昆明小鼠, 體質量20~22 g, 購于中國軍事醫學科學院實驗動物中心【SCXK- (京) 2016-0002】。

  1.2、 蠐螬多肽的提取純化及鑒定

  1.2.1 、提取

  取5 g蠐螬粉于含100 ml蒸餾水的燒杯中并調pH至8.0, 向其加入木瓜蛋白酶攪拌, 置于55℃水浴鍋水浴2.5 h, 然后置于100℃沸水10 min終止酶解反應, 10 000 r/min離心15 min, 收集上清為蠐螬多肽粗提取物;粗提取物與10%三氯乙酸1.25 ml搖勻, 靜置10 min, 4 000 r/min離心15 min, 取3 ml上清液加入2 ml雙縮脲試劑混勻, 靜置10 min后2 000 r/min離心10 min, 取上清于540 nm處測吸光度值, 同時制作谷胱甘肽標準曲線, 計算蠐螬多肽質量濃度及提取率。

  1.2.2、 純化

  采用Mr 10 000膜超濾粗提物得>Mr10 000和<Mr 10 000多肽, 然后用10 ml玻璃分離柱, 0.02 mol/L的Tiris-HCl作為緩沖液, 0.5 mol/L的NaCl做梯度洗脫, 洗脫流速1 ml/min, 上樣質量濃度25 mg/ml的上樣量1~2 ml進行離子層析, 按洗脫峰收集分離純化<Mr 10 000的蠐螬多肽, 備用。

  1.2.3 、鑒定

  采用Tricine-SDS-PAGE法鑒定蠐螬多肽相對分子質量, 首先按4∶1取蠐螬多肽和5×loading Buffer混合, 沸水浴10 min, 冷至室溫備用;然后按照凝膠配方制膠;其次灌膠:取制膠架、1.5 mm制膠板、制膠夾和電泳槽一套, 組裝并檢查是否漏膠, 用加樣槍緩緩注膠于裝置內, 加樣后用去離子水壓平界面, 靜置等待分層, 同理加入濃縮膠, 插入10孔梳子, 準備電泳;最后點樣:裝備好電泳設備后槽中加入電泳液, 依次加點樣蛋白Marker 5?l和樣品30?l。

  1.3 、動物分組與給藥處理

  取50只健康昆明小鼠隨機分對照組、模型組 (環磷酰胺組) 、蠐螬多肽組;蠐螬組小鼠每天1次灌服不同劑量蠐螬多肽 (50、100、200 mg/kg) , 對照組和模型組灌服等量生理鹽水, 連續灌服20 d, 實驗結束前3 d, 除對照組外其余小鼠每天腹腔注射環磷酰胺 (CY) 50 mg/kg, 連續3 d。

  1.4 、小鼠白細胞數與臟器指數的測定

  實驗結束小鼠稱體質量, 取全血于抗凝管中, 采用全血細胞分析儀檢測白細胞數;頸椎脫臼處死小鼠, 摘取脾臟、肝臟、腎臟, 生理鹽水清洗, 濾紙吸干后稱質量, 按照公式計算臟器指數=臟器質量 (mg) /體質量 (g) 。

  1.5、 小鼠遲發型變態反應 (DTH) 檢測

  末次給藥后小鼠腹部剃毛, 均勻涂抹50?l二甲苯致敏, 4 d后在小鼠右耳均勻涂抹20?l二甲苯, 24 h后將小鼠頸椎脫臼處死, 用直徑為8 mm打孔器在左右耳相同位置取下圓耳片稱質量, 記錄致敏前后質量之差即為其耳脹程度。

  1.6、 小鼠淋巴細胞和巨噬細胞制備

  處死小鼠無菌操作取脾于200目細胞篩研碎, 收集細胞懸液, 3 000 r/min離心4 min, 棄上清PBS懸浮細胞, 加紅細胞裂解液1~2 min, 3 000 r/min離心4 min, 棄上清反復洗, 培養基重懸細胞, 加入細胞培養皿37℃5%CO2培養箱培養2~4 h, 收集未貼壁懸浮細胞, 3 000 r/min離心4 min, 棄上清加完全培養基重懸細胞, 計數調整細胞數至1×106/ml;同樣方法收集貼壁細胞, 制備脾臟巨噬細胞;無菌操作取脛骨和股骨, 收集骨髓細胞于細胞培養皿, 同理脾細胞制備相同, 制備骨髓淋巴細胞和巨噬細胞備用 (運晨霞等) [8]。

  1.7 、小鼠淋巴細胞增殖檢測

  取100?l脾細胞 (或骨髓細胞) 和100?l完全培養基加入96孔細胞板, T淋巴細胞組每孔加5?l 100?g/ml ConA, B淋巴細胞組每孔加2?l 1 mg/ml LPS, 置37℃5%CO2培養箱培養24 h, 然后每孔加入8?l 5 mg/ml MTT繼續培養4 h, 吸棄上清每孔加150?l DMSO, 振蕩10 min酶標儀570 nm測OD值, 計算細胞增殖率%=處理組吸光度值/對照組吸光度值×100%

  1.8 、小鼠淋巴細胞分泌NO檢測

  吸取細胞上清100?l至酶標板中, 每孔加入等量Griess試劑, 室溫反應10 min, 置于490 nm測吸光值, 根據NaNO2標準曲線, 計算細胞分泌NO量。

  1.9 、染色法檢測巨噬細胞吞噬功能

  取100?l巨噬細胞懸液加入96孔細胞培養板, 置37℃5%CO2培養箱培養24 h, 棄上清, 每孔各加0.075%的中性紅100?l, 繼續培養3 h, 棄去中性紅, 用PBS洗2次, 加細胞裂解劑 (醋酸∶無水乙醇=1∶1 V/V) , 酶標儀540 nm測吸光度值。

  1.1 0 、流式細胞技術檢測巨噬細胞的吞噬能力

  1.1 0. 1、 CFSE標記雞紅細胞[9]

  取雞靜脈采血, 制備新鮮雞紅細胞 (cRBC) , 加入PBS稀釋, 1 600 r/min離心5 min, 棄上清, PBS重復洗2次, 用RPMI1640培養液將雞紅細胞數調為4×107/ml, 加入10 mmol/L的CFSE使其終濃度為5?mol/L, 37℃培養箱恒溫孵育15 min, 取出加培養液終止反應, 1 600 r/min離心5 min, 棄上清, 培養液洗2次, 懸浮細胞計數, 將CFSE-cRBC細胞數調為2×106/ml, 以備用。

  1.1 0. 2、 CFSE標記雞紅細胞與巨噬細胞共孵育[10]

  將收集的巨噬細胞加入24孔細胞培養板, 置于37℃5%CO2培養箱內培養2~4 h, 取出棄上清加無菌PBS沖洗2次, 向細胞培養板各孔加2×106/ml CFSE-cRBC細胞液1 ml, 然后將其置于37℃5%CO2培養箱內共同孵育2~4 h。

  1.1 0. 3 、流式細胞儀檢測巨噬細胞的吞噬能力[11]

  收集共同孵育的巨噬細胞和雞紅細胞于離心管, 1 600 r/min離心5 min, 棄上清, 加入緩沖液重懸細胞并將細胞數調為4×106/ml, 分別取各組100?l細胞懸液于流式管, 上流式細胞儀檢測。

  1.1 1、 血清溶血素含量測定

  結束前7 d小鼠腹腔注射5%雞紅細胞懸液0.2 ml, 末次給藥24 h后, 采血制備血清, 生理鹽水100倍稀釋血清, 取稀釋血清1 ml與5%雞紅細胞懸液0.5 ml以及10%豚鼠補體1 ml混合, 37℃溫育30 min, 0℃終止反應, 離心取上清, 置于紫外分光光度計540 nm測OD值。

  1.1 2、 統計學分析

  數據以平均數±標準差表示, 采用t檢驗分析, P<0.05認為差異有統計學意義。

  2、 結果

  2.1 、蠐螬多肽的提取純化與鑒定

  采用酶解法制備蠐螬多肽, 其中料液比1∶20、加酶量和酶解的時間分別為6 000 U和2.5 h, 利用谷胱甘肽標準曲線測得蠐螬多肽粗提取物質量濃度為37.01 mg/ml, 提取率為31.63%;通過超濾和離子層析得2個組分蠐螬多肽 (圖1) , 收集高峰洗脫出來多肽, 采用TricineSDS-PAGE鑒定蠐螬多肽分子大小, 結果觀察電泳圖, 根據Marker蛋白相對分子質量對比, 提取的蠐螬多肽分子為相對分子質量8 000~9 000的小肽 (圖2) 。

  2.2、蠐螬多肽對小鼠臟器指數的影響

  根據小鼠體質量和臟器質量比較, 結果小鼠臟器指數見表1。由表1知, 模型組小鼠脾臟肝臟胸腺指數顯著低于對照組, 而蠐螬組小鼠脾臟肝臟胸腺指數提高, 且顯著高于模型組, 隨著蠐螬多肽劑量增加, 其中脾臟指數逐漸提高, 存在著劑量效應關系。

  圖1 蠐螬多肽提取物離子層析純化圖
圖1 蠐螬多肽提取物離子層析純化圖

  Fig 1 Ion chromatography purification of polypeptides extracts from the grub

  圖2 Tricine-SDS-PAGE分析蠐螬多肽分子大小
圖2 Tricine-SDS-PAGE分析蠐螬多肽分子大小

  Fig 2 Tricine-SDS-PAGE analysis for the molecule size of grub polypeptides

  2.3 、蠐螬多肽對免疫抑制小鼠淋巴細胞增殖和分泌NO的影響

  采用MTT法對免疫抑制小鼠不同組織淋巴細胞增殖分析, 結果模型組小鼠T、B淋巴細胞存活率明顯低于對照組, 蠐螬組脾臟和骨髓T、B淋巴細胞存活率高于模型組, 其中脾臟B淋巴細胞存活率顯著增加, 而且高于脾臟T淋巴細胞 (圖3a) ;蠐螬組骨髓T淋巴細胞存活率為81.48%±5.23%, B淋巴細胞存活率為95.27%±5.56%, 骨髓B淋巴細胞存活率顯著高于T淋巴細胞 (圖3b) 。

  表1 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠臟器指數的影響
表1 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠臟器指數的影響

  a) P<0.05, b) P<0.01, vs control group;c) P<0.01, vs model group.

  采用Griess法分析淋巴細胞分泌NO情況, 結果模型組小鼠脾臟和骨髓T、B淋巴細胞NO分泌量明顯低于對照組, 蠐螬組T、B淋巴細胞NO分泌量較模型組明顯增加, 隨蠐螬多肽劑量增加淋巴細胞分泌NO量逐漸提高, 存在劑量依賴關系 (圖4) , 其中脾臟T淋巴細胞NO量達到 (1.33±0.11) mmol/L, 而B淋巴細胞高達 (1.26±0.08) mmol/L (圖4a) , 骨髓T淋巴細胞NO濃度達到 (1.55±0.05) mmol/L, B淋巴細胞高達 (1.34±0.13) mmol/L (圖4b) , 脾臟和骨髓T淋巴細胞分泌NO量高于B淋巴細胞。

  圖3 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠淋巴細胞增殖的影響
圖3 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠淋巴細胞增殖的影響

  Fig 3 Effects of grub polypeptides on the proliferation of lymphocytes in immunosuppressive mice

  a) Splen;b) bone marrow.**P<0.01, vs control group;△P<0.05, vs model group.

  圖4 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠淋巴細胞NO分泌的影響
圖4 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠淋巴細胞NO分泌的影響

  Fig 4 Effects of grub polypeptides on NO secretion from lymphocytes of immunosuppressive mice

  a) Splen;b) bone marrow.**P<0.01, vs control group;△P<0.05, △△P<0.01, vs model group.

  2.4、 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響

  采用分光光度法分析巨噬細胞吞噬功能, 結果模型組腹腔脾臟骨髓巨噬細胞吸光度值顯著低于對照組, 蠐螬組小鼠腹腔骨髓脾臟巨噬吸光度值高于模型組, 隨著蠐螬多肽劑量增加吸光度值提高, 存在劑量效應關系 (圖5) ;3種組織巨噬細胞之間比較, 腹腔和脾臟巨噬細胞吸光度值高于骨髓巨噬細胞。采用流式細胞技術分析腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力, 結果蠐螬組巨噬細胞吞噬雞紅細胞熒光強度強于模型組, 巨噬細胞吞噬雞紅細胞陽性細胞數不明顯高于模型組, 結果提示巨噬細胞吞噬能力增強了 (圖6) 。

  圖5 分光光度法分析蠐螬多肽對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響
圖5 分光光度法分析蠐螬多肽對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響

  Fig 5 Effects of grub polypeptides on the phagocytosis of macrophages from immunosuppressive mice detected by spectrophotometry

  **P<0.01, vs control group;△P<0.05, △△P<0.01, vs model group.

  2.5、 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠白細胞數和溶血素的影響

  采用分光光法檢測小鼠血清溶血素含量, 結果對照組和蠐螬多肽組小鼠溶血吸光度值顯著高于模型組組, 隨著蠐螬多肽劑量增加小鼠血清溶血素含量逐漸提高, 但不存在劑量效應關系。采用血細胞分析儀檢測小鼠血液中白細胞數, 結果模型組小鼠血液白細胞數低于對照組, 蠐螬組小鼠血液白細胞總數均高于模型組, 隨著劑量增加白細胞數提高, 且高劑量組呈現極顯著性差異, 結果提示蠐螬多肽能增加小鼠血液中白細胞的數量 (表2) 。

  表2 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠白細胞與溶血素的影響
表2 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠白細胞與溶血素的影響

  a) P<0.05, b) P<0.01, vs control group;c) P<0.05, d) P<0.01, vs model group.

  圖6 流式細胞技術分析蠐螬多肽對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響
圖6 流式細胞技術分析蠐螬多肽對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響

  Fig 6 Effects of grub polypeptides on the phagocytosis function of macrophages from immunosuppressive mice detected by flow cytometry technology

  *P<0.05, **P<0.01, vs model group.

  2.6、 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠DTH反應強度的影響

  DTH是檢測細胞免疫功能的常用方法, 通過稱重小鼠左右耳片質量, 計算耳腫脹度。結果模型組小鼠耳腫脹度顯著低于對照組, 中高劑量蠐螬多肽組小鼠耳腫脹度高于模型組, 隨著蠐螬劑量增加耳腫脹度顯著增加, 存在著劑量效應關系 (圖7) 。

  圖7 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠DTH反應強度的影響
圖7 蠐螬多肽對免疫抑制小鼠DTH反應強度的影響

  Fig 7 Effects of grub polypeptide on DTH response intensity in immunosuppressed mice

  *P<0.05, vs control group;△P<0.05, △△P<0.01, vs model group.

  3 、討論

  活性肽是由20種天然氨基酸以不同的組成和排列方式構成的環形或線性肽類的總稱, 源于蛋白質的功能性化合物, 而活性肽在母體蛋白中通常沒有活性[12], 因此生物活性肽的制備引起越來越多的學者關注和研究。目前制備生物活性肽的最常用方法是酶水解法, 經酶解植物或動物蛋白獲得多肽具有良好的理化性質和功能性質[13,14]。酶解的條件對活性多肽的制備都有至關重要, 蛋白酶在最適的環境下達到最大酶解效率。本實驗酶解的條件料液比1∶20、酶解時間2.5 h和加酶量6 000 U, 獲得螬多肽濃度為37.01 mg/ml, 提取率為31.63%, Mr為8 000~9 000。

  環磷酰胺 (CY) 作為癌癥化學治療藥物, 是一種作用強、療效好的常用免疫抑制劑廣泛應用于臨床建立小鼠免疫抑制模型, 用來觀察免疫促進藥物對免疫功能的影響, 但因其非特異性的毒性作用, 除殺傷癌細胞外對正常細胞具有毒性作用[15,16,17]。本研究結果表明, 與正常對照組比較, CY模型組小鼠脾臟淋巴細胞增殖、NO分泌和巨噬細胞吞噬功能明顯被抑制, 血清溶血素含量顯著降低, 結果表明環磷酰胺具有明顯的免疫毒性。

  白細胞是機體防御系統的重要組成部分, 白細胞數降低, 提示機體抵御細菌入侵的能力減弱, 易受感染。本研究蠐螬多肽能使免疫低下小鼠的外周血白細胞數升高至正常水平, 表明蠐螬多肽可以改善機體的細胞免疫狀態。單核巨噬細胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的標志之一, 蠐螬多肽提高免疫抑制小鼠巨噬細胞的吞噬能力, 對免疫抑制小鼠吞噬功能有促進作用。

  免疫器官的發育決定了免疫功能的強弱, 機體免疫功能情況可由淋巴細胞的增殖能力間接反映, 如淋巴細胞的活化以及分化為免疫活性細胞, 進而增強機體的免疫應答能力[18]。本試驗淋巴細胞增殖轉化結果顯示高劑量蠐螬多肽能夠促進免疫抑制小鼠脾臟T、B淋巴細胞增殖, 低劑量促進作用不明顯。DTH體現了機體的細胞免疫狀態, 是T細胞介導的細胞免疫應答[19]。本研究結果顯示, 蠐螬多肽可以增強小鼠DTH強度, 且存在計量效應關系, 隨蠐螬多肽的濃度增加而增強。說明蠐螬多肽可以改善免疫抑制小鼠的細胞免疫功能。

  NO是一種細胞間信息傳遞的雙向調節因子, 能緩解血管平滑肌緊張度、影響淋巴細胞增殖、免疫應答等。研究報道, 細菌脂多糖能使免疫細胞NO分泌量升高, 增強機體的免疫功能[20]。研究結果表明蠐螬多肽促進免疫抑制小鼠脾臟淋巴細胞分泌NO, 提示其參與免疫調節。

  異源動物紅細胞免疫動物后, B淋巴細胞可產生抗RBC抗體, 即溶血素。這種抗體在體外與免疫源性RBC溫育后, 在補體參與下可產生溶血反應, 檢測反應體系溶血后光密度吸收值可以反映溶血素水平, B淋巴細胞產生特異性抗體的能力, 以此評價機體的體液免疫功能[21,22]。試驗結果蠐螬組小鼠外周血溶血素含量明顯高于模型組, 低劑量蠐螬多肽可極顯著提高免疫抑制小鼠外周血溶血素含量, 拮抗CY所致的體液免疫抑制, 表明蠐螬多肽能夠提高小鼠體液免疫能力。

  綜上所述, 蠐螬多肽能對免疫抑制藥環磷酰胺引起的免疫抑制小鼠特異性及非特異性免疫功能均有促進作用, 試驗結果提示其可有望成為一種新的安全高效的免疫調節劑開發, 但其免疫調節作用機制還有待進一步研究。

  參考文獻

  [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].北京:中國醫藥科技出版社, 2010:附錄45.
  [2]陳智, 鄭學燕, 朱榮剛, 等.蠐螬化學成分及藥理作用研究進展[J].食品與藥品, 2014, 16 (1) :62-64.
  [3]陽長明, 侯世祥, 王新春, 等.蠐螬與蠐螬滴眼液的成分研究[J].中藥材, 2000, 23 (12) :769-771.
  [4]金哲, 孫抒, 李基俊, 等.蠐螬提取物體外對人MGC-803胃癌細胞株凋亡相關基因作用的研究[J].中國中醫藥科技, 2004, 11 (2) :90-92.
  [5]陳梅, 邱曉星, 彭清華, 等.蠐螬提取物對兔脈絡膜新生血管VEGF和bFGF表達的影響[J].國際眼科雜志, 2008, 8 (12) :2443-2448.
  [6]喇文軍, 劉冬, 張力君, 等.離子交換層析法分離純化玉米降血壓肽的研究[J].食品工程, 2007, 9 (3) :57-60.
  [7]嚴銘銘, 曲曉波, 王旭, 等.梅花鹿茸中活性多肽的純化、測序及功能研究[J].高等學?;аП? 2007, 20 (28) :1893-1896.
  [8]運晨霞, 余曉玲, 吳光, 等.三葉黃合劑對小鼠細胞免疫功能影響的實驗研究[J].時珍國醫國藥, 2009, 20 (5) :1155-1157.
  [9] Ma H, Liu G, Ding W, et al. Diabetes-induced alteration of F4/80 (+) macrophages:a study in mice with streptozotocininduced diabetes for a long term[J]. J Mol Med, 2008, 86 (4) :391-400.
  [10] Swan R, Chung CS, Albina J, et al. Polymicrobial sepsis enhances clearance of apoptotic immune cells by splenic macrophages[J]. Surgery, 2007, 142 (2) :253-261.
  [11] Vander Top EA, Perry GA, Gentry Nielsen MJ. A novel flow cytometric assay for measurement of in vivo pulmonary neutrophil phagocytosis[J]. BMC Microbiol, 2006, 10 (6) :61.
  [12]林端權, 郭澤鑌, 張怡, 等.海洋生物活性肽的研究進展[J].食品工業科技, 2016, 37 (18) :367-373.
  [13]陳日春, 鄭寶東.鰱魚魚鱗膠原蛋白抗氧化活性肽提純及結構鑒定研究進展[J].食品安全質量檢測學報, 2017, 8 (4) :1339-1345.
  [14]師廣波, 辛寒曉, 馬艷芳, 等.固定化風味蛋白酶水解法生產高水解度大豆肽[J].食品科學技術學報, 2015, 33 (6) :51-56.
  [15]宋雁, 賈旭東, 崔文明, 等.不同途徑和劑量環磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型的對比研究[J].中國食品衛生雜志, 2013, 25 (3) :218-225.
  [16] Gong Y, Wu J, Li ST. Immuno-enhancement effects of Lycium ruthenicum Murr. polysaccharide on cyclophosphamide-induced immunosuppression in mice[J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8 (11) :20631-20637.
  [17]趙紅霞, 黃文忠, 陳華生, 等.蜜蜂巢脾提取物對小鼠免疫調節作用的影響[J].天然產物研究與開發, 2016, 28 (1) :125-130.
  [18]陳黎龍, 朱曉彤, 江青艷, 等.三肽囊素對雞脾臟淋巴細胞增殖轉化、IL-2和IL-6分泌及其基因表達的影響[J].動物學報, 2006, 52 (1) :170-174.
  [19]趙趕, 何冠蘭, 盧春遠, 等.骨碎補醇提物對免疫抑制小鼠細胞免疫功能的調節作用[J].衛生研究, 2017, 46 (1) :84-88.
  [20]趙娟, 劉揚, 馮琳, 等.細菌脂多糖誘導巨噬細胞NO信號分子釋放的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫, 2011, 10 (2) :30-32.
  [21]黃偉, 陳紹紅, 劉鈾, 等.構樹總黃酮對免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J].中國現代應用藥學, 2017, 34 (1) :8-10.
  [22] Song MF, Li G, Chen X, et al. Primary study of dendrobium polysaccharides improving immunity activity on mouse[J].Chin Pharm J, 2013, 48 (6) :428-431.

    李可,曹碩,焦思敏,沈紅,張永紅.蠐螬多肽對免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J].免疫學雜志,2019,35(05):369-376.
    相近分類: